由于高濃度的瓊脂糖濃度會影響部分活體樣本的發(fā)育和狀態(tài),瓊脂糖濃度太低又會影響樣品的穩(wěn)定性,此時,我們可以選擇將樣品圍封在FEP管中。
適合樣品:折射率和FEP、瓊脂糖相似的樣品,如斑馬魚、果蠅、線蟲、擬南介等。
樣品大?。浩脚_配有不同規(guī)格的FEP管,具體圍封方式類似于包埋方式。
圍封樣品模式圖
掃描電鏡圖像的形成需要各個系統(tǒng)相互配合,電子光學系統(tǒng)為掃描電鏡提供的電子束,信號探測系統(tǒng)將電子束與樣品相互作用產生的信號進行采集與處理。電子光學系統(tǒng)內容請參考往期文章,本篇主要對掃描電鏡的信號探測系統(tǒng)進行介紹。
激光掃描共聚焦顯微鏡是在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎上采用激光作為光源,通過使用激光掃描裝置和共軛聚焦裝置,利用計算機對所觀察的對象進行數字圖像處理的現(xiàn)代化光學顯微鏡。它能以的分辨率采集細胞或組織內部的熒光標記圖像、觀察細胞或組織內部的微細結構和形態(tài)學變化、在亞細胞水平觀察胞內重要離子濃度或 pH 的變化、結合電生理技術觀察和記錄細胞的生理活動。使用激光掃描共聚焦顯微鏡,還可以對觀察樣品進行斷層掃描和成像、重構和分析細胞的三維空間結構。
使用全新樣品定位方法創(chuàng)建多視角( Multiview) 數據
使用折射率 n=1.38 的 Scale 介質(Hama 等,Nat Neurosci 期刊,2011 年),或折射率 n=1.45 的水性澄清液(例如:CelExplorer Labs 公司生產的 FocusClear? 產品)進行透明處理的組織來完成實驗
使用可選的觸發(fā)界面維持生理條件,充分發(fā)揮成像信息和環(huán)境條件控制兩者相結合的優(yōu)勢
光透技術
組織透明處理技術能夠讓您深入大型生物樣品內,例如:組織切片、大腦、胚胎、器官球狀體或活組織切片。您可以使用增強的光學穿透深度來捕獲整個器官的熒光信號。這也令其成為一項具有發(fā)展前景的技術,例如:檢測小鼠大腦神經元網絡。
掃描電鏡除能檢測二次電子圖像以外,還能檢測背散射電子、透射電子、特征x射線、陰極發(fā)光等信號圖像。其成像原理與二次電子像相同。在進行掃描電鏡觀察前,要對樣品作相應的處理。
對樣品的要求
1、不會被電子束分解
2、在電子束掃描下熱穩(wěn)定性要好
3、能提供導電和導熱通道
4、大小與厚度要適于樣品臺的安裝
5、觀察面應該清潔,物
6、進行微區(qū)成分分析的表面應平整
7、磁性試樣要預先去磁,以免觀察時電子束受到磁場的影響